Мікробіологічний аналіз препаратів сільськогосподарського призначення ЕКD1 та ЕКD2

Мета роботи: провести мікробіологічний аналіз препаратів сільськогосподарського призначення ЕКD1 та ЕКD2.
ЕКD1 та ЕКD2 становлять собою прозорі рідини коричневого кольору з невеликим осадом чорного кольору та характерним кислим запахом. Кислотність середовищ становила 3,8-4,0 та 5,5-5,8 рН відповідно.

1 етап роботи.

Визначення загального мікробного числа (ЗМЧ).
З метою визначення ЗМЧ використовували напіврідке тіогліколеве середовище (ТГС). Результати дослідження реєстрували на 4-5 добу культивування. Встановлено, що ЗМЧ для суспензії ЕКD1, складала - 1010 КУО в мл. Тоді як для суспензії ЕКD2 - 1012 КУО в мл. Ріст бактеріальних клітин у вказаному середовищі, спостеріагали в товщі агару з видимою стерильною зоною на ділянці контакту з киснем повітря (у верхній частині пробірки) розміром від 0,5 до 1 см. Колонії мали вигляд гречаних зерен, гвіздків, комет, грудочок та дисків. Вказаний характер росту властивий для мікроорганізмів з анаеробним або макроаерофільним типом метаболізму (ріст за відсутності або зниженій концентрації кисню).

2 етап роботи

Підбір живильних середовищ  та оптимальних умов культивування мікроорганізмів.
З цією метою 1 мл розведень вихідних бактеріальних досліджуваних суспензій з концентрацією клітин 10-7, 10-8, 10-9 КУО в мл у 3 повторах висівали в поживні середовища за методом глибинного посіву. Використовували наступні середовища: мясо пептонний агар (МПА), картопляно-глюкозний агар (КГА), картопляний агар (КА), агаризоване тіогліколеве середовище, середовище Ешбі. На середовищах МПА, КГА, КА, середовище Ешбі культивування проводили в аеробних умовах за температури 28◦С, тоді як на середовищі ТГС за аеробних та анаеробних умов.
На середовищі МПА, КА та КГА (на 14 добу культивування) спостерігали суцільний ріст дрібних бактеріальних колоній та мікроскопічних грибів різного морфотипу. ЗМЧ мікроскопічних цвілевих грибів для проби ЕКD1 становило 108 - 109 КУО в мл. За результатами попередньої ідентифікації виділені цвілеві гриби належали до родів: Cladosporium (C. cladosporioides, C. herbarum), Penicillum(P.expansum, P.aurantiogriseum) та Aspergillus (A.sydovi). З проби ЕКD2 виділили цвілеві гриби іншого морфотипу (зигоміцети), ЗМЧ не встановлено.

На середовищі КА в зразках проби ЕКD2 спостерігали формування  плоских, слизових, сіро-зелених колоній характерних для бактерій родини Pseudomonacea в титрі 2х107 КУО в мл.

На середовищі ТГС за аеробних умов культивування спостерігали ріс дріжджеподібних грибів в титрі 108- 1010 КУО в мл в обох пробах та бактерій (проба ЕКD1 -  2х107 КУО в мл, проба ЕКD 2  - 5х108 КУО в мл). В товщі агару спостерігався ріст дрібних дископодібних колоній яскраво-білого кольору в кількості 109 КУО в мл для проби ЕКD 1, та більше 1012 КУО в мл для проби ЕКD 2.

За анаеробних умов культивування на середовищі ТГС при температурі 28оС в зразках проби ЕКD1 в товщі агару спостерігали ріст дископодібних яскраво-білих колоній діаметром 3-4 мм в кількості 3х109 КУО в мл. На поверхні агару спостерігали ріст яскраво-білих опуклих колоній з рівним контуром діаметром 3-4 мм та невелику кількість прозорих, дрібних, слизових колоній. В зразках проби ЕКD2 в товщі агару спостерігали ріст колоній декільк типів: яскраво-білі дископодібної форми діаметром 1-2 мл., в титрі 1-2 млр. клітин в мл. та дископодібні яскраво-білі  колонії діаметром 3 - 4 мм в кількості 2х107 КУО в мл. На поверхні агару - суцільний ріст прозорих, дрібних, слизових колоній
На безазотному середовищі Ешбі спостерігали суцільний ріст колоній бактеріальних клітин світло-коричневого кольору, для проби ЕКD1 та безбарвних колоній для проби ЕКD2.

Таким чином, для культивування бактерій, які входять до складу досліджуваних препаратів придатні середовища збагачені факторами росту та речовинами-відновниками.

3 етап роботи

Отримання монокультур бактерій, що входять до складу досліджуваних препаратів та вивчення їх морфології.
Для отримання монокультур бактерій проводили посів бактеріальних клітин Т-подібним методом з поодиноких колоній на середовище ТГС, ізоляти цвілевих грибів на середовище КГА.

В результаті проведених досліджень показано, що всі виділені бактеріальні ізоляти здатні до культивування в аеробних умовах  за температури 28◦С на середовищі ТГС. Бактерії з анаеробним типом метаболізму утворювали характерні колонії на 4-5 добу культивування. Бактерії з аеробним типом метаболізму давали ріст на 2 добу культивування.

Таким чином, отримали:
1. 5 ізолятів бактеріальних культур з можливим анаеробним типом метаболізму, здатних до культивування в аеробних умовах;
2. 10 ізолятів бактеріальних культур з можливим аеробним типом метаболізму;
3. 7 ізолятів цвілевих грибів;
4. 2 ізоляти дріжджеподібних грибів.